Papel do fator de ativação de plaquetas na infecção de macrófagos por leishmania infantum e identificação de uma Paf-Acetilhidrolase no parasita / Role of platelet-activating factor in macrophage infection by Leishmania infantum and identification of the parasite PAF acetylhydrolase

A leishmaniose visceral é causada pelo parasita Leishmania infantum. A infecção ocorre quando flebótomos infectados se alimentam na derme do hospedeiro vertebrado, inoculando o parasita. A infecção produz uma resposta com diversas moléculas inflamatórias, como os mediadores lipídicos. O fator de ativação de plaquetas (PAF) é um potente mediador lipídico derivado de um lisofosfolipídio. PAF participa da fisiologia normal da célula e possui um perfil pró-inflamatório. A participação de mediadores lipídicos, como eicosanóides e PAF, já foi identificada na imunopatogênese das leishmanioses. PAF gerado pelo hospedeiro tem efeito leishmanicida e de controle da infecção por L. amazonensis. PAF-acetilhidrolases (PAF-AH) são fosfolipases A2 que hidrolisam PAF e foi demonstrado que PAF-AH podem ser um fator de virulência devido a essa habilidade. O objetivo desse estudo foi avaliar o papel do PAF e de uma PAF-AH na infecção de macrófagos por L. infantum. Foi observado que PAF 1μM, quando adicionado durante e após a infecção, foi capaz de diminuir 50% da infecção após 72 horas, bem como a viabilidade dos parasitas dentro dos macrófagos num mecanismos independente do seu receptor PAFR e da produção de óxido nítrico. PAF 10μM interrompeu o crescimento de promastigotas de L. infantum em cultura axênica. Uma PAFAH, com elevada identidade e semelhança com PLA2/PAF-AH de outros tripanossomatídeos, foi identificada no genoma de L. infantum. A clonagem e expressão recombinante produziu uma proteína de cerca de 69kDa, com atividade PAF-AH. Frações celulares do parasita, enriquecidas com estruturas de membrana também apresentaram atividade PAF-AH. Os resultados indicam que PAF é capaz de diminuir a infecção de macrófagos por L. infantum e que o parasita possui uma PAF-AH funcional possivelmente envolvida com sua virulência.

Visceral leishmaniasis is caused by Leishmania infantum parasites. Infection occurs when infected sandflies feed on vertebrate host skin delivering the parasite which survive, multiply and spread on the parasitophorous vacuoles of macrophages. The inflammatory response during the infection leads to the production of diverse bioactive molecules, as lipid mediators. The platelet activating factor (PAF) is a lipid mediator derived from a lysophospholipid. PAF has a role in normal cellular physiology, acting as proinflamatory molecule. The participation of some lipid mediators, as eicosanoids and PAF has been identified in leishmaniasis. PAF produced by the host is able to kill the parasite and control the infection by L. amazonensis. PAF-acetylhydrolases (PAF-AH) are phospholipases A2 (PLA2) that hydrolyse PAF, and possibly involved in pathogen virulence. The aim of this study was to evaluate the role of PAF on macrophages infection by L. infantum and identify a PAF-AH expressed by the parasite. PAF 1μM, added during and after the infection, was able to reduce approximately 50% of infection, as well as, the viability of parasites inside macrophages. Apparently this reduction occurs by an classical PAF receptor and nitric oxide production independent mechanism. PAF 10μM inhibited L. infantum promastigotes growing in axenic culture. A PAF-AH with high identity to PLA2/PAF-AH of others trypanosomatids was identified in L. infantum genome. The cloning and recombinant expression produced a 69kDa protein with PAF-AH activity. Cellular fractions from parasites, with membrane structures also presented PAF-AH activity. The results suggest that PAF is able to decrease machophage infection by L. infantum witch has a functional PAFAH possibly related to its virulence.

Parasitismo de leucocitos y trombocitos de gallus gallus l. por plasmodium (novyella) juxtanucleare (apicomplexa: plasmodiidae) / Parasitism of leukocytes and thrombocytes of gallus gallus L. by plasmodium (novyella) juxtanucleare (apicomplexa: plasmodiidae)

Se realizó un investigación del parasitismo de plasmodium juxtanucleare en gallinas sin razas definida, provenientes de criaderos rústicos en el municipio de Seropédica, estado de Río de Janeiro, de Brasil. Se realizaron frotis sanguíneo periféricos, los cuales fuero coloreados con giemsa diluido en tampón sorensen pH6,8. En el examen hemoscópico se puede observar en aves con alto índice de (< 10 por ciento ) formas parasitarias de trofozoítas y esquizontes en el citoplasma de células de la línea leucocitica y trofozoítas en células de la línea trombocítica. Las observaciones en el presente estudio hacen inferir que la cepa de P. juxtanuclear que ocurre en Seropédica realiza esquizogonia fanerozóica. Este trabajo constituye el primer hallazgo de formas de P. juxtanucleares en leucocitos

Inhibiciòn de la agregaciòn plaquetaria por extractos de plantas de uso medicinal en Paraguay / Annual reports 1995 / Inhibition of platelet aggregation by medicinal plants usein Paraguay

Con el propòsito de identificar extractos y luego aislar productos on actividad inhibidoria sobre la agregaciòn plaquetaria in vitro fueron probados 21 extractos alcohòlicos de plantas antitrombòlicos y en transtornos circulatorios e inmunològicos. La inhibiciòn de la agregaciòn se determinò mediante el mètodo turbo-densitomètrico (coagulòmetro AccuStasisTM 1000) midiendo el tiempo de agregaciòn del plasma rico en plaquetas inducido por adenosina 5 difosfato (ADP), colàgeno y epinefrina a las concentraciones iniciales de 2x10-4mo1/L, 2 mg/ml y 1x10-4mo1/L respectivamente y como control positivo de la inhibiciòn de la agregaciòn plaquetaria se usò aspirina a la concentraciòn de 0,1g/ml. La evaluaciòn cualitativa se realizò por apreciaciòn microscòpica (A 100x) de frotis teñidos con Giemsa del agregado plaquetario o nò por los extractos y los controles. Del screening resultò activo el extracto de una planta medicinal perteneciente a la familia Myrtaceae a la concentraciòn de 272ug/ml con los porcentajes de inhibiciòn de 96 por ciento a la concentraciòn de 0,18x10-4mo1/L de ADP y 94,4 por ciento a la concentraciòn de 0,045x10-4mo1/L de ADP. Tambièn resultò activo el extracto de una planta medicinal perteneciente a la familia Flacourtiaceae con un porcentaje de inhibiciòn de 92 por ciento al ser inducido por ADP a la concentraciòn de 0,045x10-4mo1/L. Este estudio indica el potencial de algunos extractos estudiados y justifica el aislamiento de compuestos puros de los extractos activos con mejores propiedades.

Inhibiciòn de la agregaciòn plaquetaria por extractos de plantas de uso medicinal en Paraguay / Annual reports 1995 / Inhibition of platelet aggregation by medicinal plants usein Paraguay

Con el propòsito de identificar extractos y luego aislar productos on actividad inhibidoria sobre la agregaciòn plaquetaria in vitro fueron probados 21 extractos alcohòlicos de plantas antitrombòlicos y en transtornos circulatorios e inmunològicos. La inhibiciòn de la agregaciòn se determinò mediante el mètodo turbo-densitomètrico (coagulòmetro AccuStasisTM 1000) midiendo el tiempo de agregaciòn del plasma rico en plaquetas inducido por adenosina 5 difosfato (ADP), colàgeno y epinefrina a las concentraciones iniciales de 2x10-4mo1/L, 2 mg/ml y 1x10-4mo1/L respectivamente y como control positivo de la inhibiciòn de la agregaciòn plaquetaria se usò aspirina a la concentraciòn de 0,1g/ml. La evaluaciòn cualitativa se realizò por apreciaciòn microscòpica (A 100x) de frotis teñidos con Giemsa del agregado plaquetario o nò por los extractos y los controles. Del screening resultò activo el extracto de una planta medicinal perteneciente a la familia Myrtaceae a la concentraciòn de 272ug/ml con los porcentajes de inhibiciòn de 96 por ciento a la concentraciòn de 0,18x10-4mo1/L de ADP y 94,4 por ciento a la concentraciòn de 0,045x10-4mo1/L de ADP. Tambièn resultò activo el extracto de una planta medicinal perteneciente a la familia Flacourtiaceae con un porcentaje de inhibiciòn de 92 por ciento al ser inducido por ADP a la concentraciòn de 0,045x10-4mo1/L. Este estudio indica el potencial de algunos extractos estudiados y justifica el aislamiento de compuestos puros de los extractos activos con mejores propiedades

Treatment of T. cruzi infected human platelet concentrates with aminomethyltrimethyl psoralen (AMT) and ultraviolet A (UV-A) light: preliminary results

The present measures adopted to prevent transfusion-associated Chagas' disease include screening of blood donors, and/or the inactivation of T. cruzi in collected blood using gentian violet (GV), as a trypanocidal agent. In this study, we investigated the efficacy of the combined use of AMT and UV-A in inactivating T. cruzi in infected human platelet concentrates. Human platelet concentrates were infected with T. cruzi (2 x 10(8)/ml) of the Y strain, transfered to PL 269 (Fenwal Laboratories) containers, and treated with GV (250 micrograms/ml), and ascorbic acid (1 mg/ml); GV, ascorbic acid and UV-A; GV and UV-A; AMT (40 microG/ml) and ascorbic acid; AMT, ascorbic acid and UV-A; AMT and UV-A; UV-A alone; and untreated (control). All UV-A treated platelet concentrates were exposed to UV-A doses of 24, 92, 184, 276, 368 and 644 kJ/m2, and the microscopical research of active T. cruzi was performed, using the microhematocrit technique, 1, 6 and 24 hours after each treatment. A high number of active forms of T. cruzi was observed in all condictions, except when GV was used as the trypanocidal agent, providing evidence of the failure of AMT and UV-A in inactivating T. cruzi in infected human platelet concentrates.

Role of platelets and complement in the clearance of epimastigote forms of Trypanosoma cruzy

1. Trypanosoma cruzi epimastigote forms are very rapidly removed from the circulation of normal and C5-deficient mice. Depletion of C3 by cobra venom factor results in a significant delay in parasite clearance. 2. During parasite clearance there is a significant decrease in the number of circulating platelets and parasite clearance is considerably delayed in thrombocytopenic animals. 3. In vitro incubation of epimastigote forms with normal mouse serum leads to the formation of parasite clumps provided that platelets are present. Innactivation of factor B or depletion of C3 prevents this phenomenon. 4. When epimastigotes are incubated with normal mouse serum they absorb one or more factors required for their aggregation with platelets. 5. It is suggested that in mice T. cruzi epimastigote forms are removed from circulation by the alternative pathway of complement activation and that both C3 and platelets are required for parasite clearance